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1.本公开属于医药领域，涉及一种通式(i)或(ii)所示的氘代吡唑并吡啶类化合物、其制备方法、含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂的用途，特别是作为atr激酶抑制剂的用途和在用于制备治疗和/或预防过度增殖性疾病的药物中的用途。
背景技术：
2.无论是正常细胞还是肿瘤细胞中，每天都会出现成千上万次dna的损伤。这使得dna损伤修复在维持基因组的稳定性和细胞存活方面起到至关重要的作用。相比较于正常细胞，肿瘤细胞承受了更大的复制压力，携带更多的内源性dna损伤，并且经常出现一个或多个dna损伤修复通路的缺失。这使得肿瘤细胞的存活更加依赖于dna损伤修复的顺利进行。
3.同源重组修复是dna双链断裂的主要修复方式，以未受损的姐妹染色单体的同源序列作为其修复的模板复制受损处的dna序列，精确修复dna。这种修复方式主要发生在细胞的g2期和s期。atr是同源重组修复通路中的关键酶，属于pikk家族。当atr/atrip复合物与覆盖了复制蛋白a(rpa)的受损dna结合后，atr被激活并通过磷酸化下游蛋白chk1和smarcal等，调节细胞周期各个检查点，引起细胞周期阻滞；保证受损dna的稳定性；提高dntp浓度，促使dna损伤得以修复。细胞周期s期中出现的dna损伤修复主要由atr通路完成，说明atr对于保证细胞增殖非常重要。对于临床肿瘤样品的分析结果表明在多种肿瘤组织中，例如胃癌、肝癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌等，均观察到atr表达水平升高。并且在卵巢癌、胰腺癌病人中，高水平的atr往往伴随着较低的存活率。由此可见atr是一个重要的肿瘤治疗的靶标。
4.现已公开的atr抑制剂的专利申请包括wo2010071837a1、wo2011154737a1、wo2016020320a1、wo2016130581a2、wo2017121684a1、wo2017118734a1、wo2018049400a1、wo2019050889a1和wo2014140644a1等。
技术实现要素：
5.本公开的目的在于提供一种通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐：
[0006][0007]
其中：
[0008]
r1至r
11
和ra至rm相同或不同，各自独立地为氢原子或氘原子；
[0009]
条件是，r1至r
11
和ra至rm中至少有一个为氘原子。
[0010]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中ra至rm中至少有一个为氘原子。
[0011]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rd至rf中至少有一个为氘原子。
[0012]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rd至rf中仅有一个为氘原子。
[0013]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rd至rf中仅有两个为氘原子。
[0014]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rd、re和rf均为氘原子。
[0015]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中ra至rc中至少有一个为氘原子。
[0016]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中ra至rc中仅有一个为氘原子。
[0017]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中ra至rc中仅有两个为氘原子。
[0018]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中ra、rb和rc均为氘原子。
[0019]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rh至rj中至少有一个为氘原子。
[0020]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rh至rj中仅有一个为氘原子。
[0021]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rh至rj中仅有两个为氘原子。
[0022]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rh、ri和rj均为氘原子。
[0023]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rk至rm中至少有一个为氘原子。
[0024]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rk至rm中仅有一个为氘原子。
[0025]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rk至rm中仅有两个为氘原子。
[0026]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，其中rk、r
l
和rm均为氘原子。
[0027]
本公开的典型化合物包括但不限于：
[0028][0029]
本公开的另一方面涉及通式(ia)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，
[0030][0031]
其中：
[0032]
r1至r8、r
10
、r
11
和ra至rm相同或不同，各自独立地为氢原子或氘原子；
[0033]rw
为氨基保护基；优选为thp；
[0034]
条件是，r1至r8、r
10
、r
11
和ra至rm中至少有一个为氘原子。
[0035]
本公开的典型中间体化合物包括但不限于：
[0036][0037]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐的方法，该方法包括：
[0038][0039]
通式(ia)或(iia)的化合物经脱保护得到通式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐，
[0040]
其中：
[0041]rw
为氨基保护基；优选为thp；
[0042]
r9为氢原子；
[0043]
r1至r8、r
10
、r
11
和ra至rm如通式(i)或(ii)中所定义。
[0044]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少2000倍的丰度的氘，其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0045]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少3000倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0046]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少3340倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0047]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少3500倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0048]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少4000倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0049]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少4500倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0050]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少5000倍的丰度的氘；其中所
述的氘的天然丰度为0.015％；
[0051]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少5500倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0052]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少6000倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0053]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少6333.3倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0054]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少6466.7倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0055]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少6600倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％；
[0056]
在本公开的一些实施方案中，所述的通式(i)、(ia)、(ii)或(iia)所示的化合物或其可药用盐，其中所述的氘原子为具有大于氘的天然丰度至少6633.3倍的丰度的氘；其中所述的氘的天然丰度为0.015％。
[0057]
本公开的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有本公开通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0058]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备用于抑制atr激酶的药物中的用途。
[0059]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备治疗和/或预防由atr激酶介导的疾病的药物中的用途。
[0060]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防过度增殖性疾病的药物中的用途。
[0061]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。
[0062]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
[0063]
本公开还涉及一种抑制atr激酶的方法，其包括给予所需患者有效量的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物。
[0064]
本公开还涉及一种治疗和/或预防由atr激酶介导的疾病的方法，其包括给予所需患者有效量的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物。
[0065]
本公开还涉及一种治疗和/或预防过度增殖性疾病的方法，其包括给予所需患者有效量的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物。
[0066]
本公开还涉及一种治疗和/或预防肿瘤的方法，其包括给予所需患者有效量的通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物。
[0067]
本公开进一步涉及一种通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物，其用作药物。所述药物可以用于治疗和/或预防过度增殖性疾病，特别是肿瘤。
[0068]
本公开还涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用作atr激酶抑制剂。
[0069]
本公开还涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用作治疗和/或预防由atr激酶介导的疾病的药物。
[0070]
本公开还涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗和/或预防过度增殖性疾病。
[0071]
本公开进一步涉及通式(i)或(ii)所示的化合物或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗肿瘤。
[0072]
本公开中所述的由atr激酶介导的疾病优选为过度增殖性疾病；更优选为肿瘤。
[0073]
本公开中所述的过度增殖性疾病优选选自乳腺癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、骨癌、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、淋巴瘤、肉瘤、眼癌和白血病。
[0074]
本公开中所述的肿瘤优选选自乳腺癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、骨癌、多发性骨髓瘤、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、淋巴瘤、肉瘤、眼癌和白血病。其中，所述的呼吸道癌包括但不限于支气管癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌；生殖器官癌包括但不限于前列腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌和输卵管癌；消化道癌包括但不限于结直肠癌、结肠癌、直肠癌、食管癌、食道癌、胆囊癌、胆管癌、胃癌和胰腺癌；泌尿道癌包括但不限于膀胱癌和肾癌(优选为肾细胞癌)；皮肤癌包括但不限于鳞状细胞癌和黑色素瘤；头颈癌包括但不限于口腔癌、头颈部鳞状细胞癌、鼻咽癌和喉癌；淋巴瘤包括但不限于霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、b-细胞淋巴瘤和弥漫性大b细胞淋巴瘤；肉瘤包括但不限于骨肉瘤、平滑肌肉瘤、软组织肉瘤和横纹肌肉瘤；白血病包括但不限于慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病和急性骨髓性白血病。
[0075]
可将活性化合物制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制本公开的组合物。因此，本公开的活性化合物可以配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药，吸入或吹入给药的各种剂型。本公开的化合物也可以配制成例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬悬浮液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆等剂型。
[0076]
作为一般性指导，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本公开化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。合适的单位剂量可以是0.1～1000mg。
[0077]
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
[0078]
片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技
术将其包衣。
[0079]
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
[0080]
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂、分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
[0081]
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
[0082]
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
[0083]
本公开的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是deltec cadd-plus.tm.5400型静脉注射泵。
[0084]
本公开的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。
[0085]
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
[0086]
可通过加入水来制备水混悬的可分散粉末和颗粒给予本公开化合物。可通过将活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂混合来制备这些药物组合物。
[0087]
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合、疾病的严重性等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物的日用量或可药用盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
[0088]
发明的详细说明
[0089]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0090]
术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含四氢吡喃基、叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。所述氨基保护基优选为四氢吡喃基，更优选为2-四氢吡喃基。
[0091]
thp为2-四氢吡喃基。
[0092]
本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或z和e)异构体、(-)-和(+)-异构体、(r)-和(s)-对映异构体、非对映异构体、(d)-和(l)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(r)-和(s)-对映异构体以及(d)-和(l)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者手性助剂来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。
[0093]
本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或或者同时包含和两种构型。
[0094]
本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺异构化。内酰胺-内酰亚胺的平衡实例如下所示：
[0095][0096]
又如当提及吡唑基时，应理解为包括如下两种结构中的任何一种或两种互变异构体的混合物。
[0097][0098]
所有的互变异构形式在本公开的范围内。化合物的命名不排除任何互变异构体。本公开的化合物包含其同位素衍生物。术语“同位素衍生物”指结构不同仅在于存在一种或多种同位素富集原子的化合物。例如，具有本公开的结构，用“氘”或“氚”代替氢，或者用
18
f-氟标记(
18
f同位素)代替氟，或者用
11
c-、
13
c-或者
14
c-富集的碳(
11
c-、
13
c-或者
14
c-碳标记；
11
c-、
13
c-或者
14
c-同位素)代替碳原子的化合物处于本公开的范围内。这样的化合物可用作例如生物学测定中的分析工具或探针，或者可以用作疾病的体内诊断成像示踪剂，或者作为药效学、药动学或受体研究的示踪剂。本公开包含各种氘化形式的化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的化合物。在制备氘代形式的化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
[0099]
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(d)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)。示例中化合物的
具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)、至少2000倍的丰度的氘(即至少30％的氘掺入)、至少3000倍的丰度的氘(即至少45％的氘掺入)、至少3340倍的丰度的氘(即至少50.1％的氘掺入)、至少3500倍的丰度的氘(即至少52.5％的氘掺入)、至少4000倍的丰度的氘(即至少60％的氘掺入)、至少4500倍的丰度的氘(即至少67.5％的氘掺入)、至少5000倍的丰度的氘(即至少75％的氘掺入)、至少5500倍的丰度的氘(即至少82.5％的氘掺入)、至少6000倍的丰度的氘(即至少90％的氘掺入)、至少6333.3倍的丰度的氘(即至少95％的氘掺入)、至少6466.7倍的丰度的氘(即至少97％的氘掺入)、至少6600倍的丰度的氘(即至少99％的氘掺入)、至少6633.3倍的丰度的氘(即至少99.5％的氘掺入)或更高丰度的氘。本公开还包括各种氘化形式的化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的化合物。在制备氘代形式的化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
[0100]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用盐或前体药物与其它化学组分的混合物，以及其它组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0101]“可药用盐”是指本公开化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
[0102]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0103]
本公开化合物的合成方法
[0104]
为了完成本公开的目的，本公开采用如下技术方案：
[0105]
方案一
[0106]
本公开通式(i)或(ii)所示的化合物或其盐的制备方法，包括以下步骤：
[0107]
[0108]
通式(ia)或(iia)的化合物在酸性条件下，经脱保护得到通式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐，
[0109]
其中：
[0110]rw
为氨基保护基；
[0111]
r9为氢原子；
[0112]
r1至r8、r
10
、r
11
和ra至rm如通式(i)或(ii)中所定义。
[0113]
以上合成方案中提供酸性条件的试剂包括但不限于氯化氢、氯化氢的1,4-二氧六环溶液、三氟乙酸、甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、me3sicl、tmsotf，优选为三氟乙酸。
[0114]
以上合成方案中氨基保护基包括但不限于2-四氢吡喃基(thp)、叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基，这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代；优选为thp。
[0115]
上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：乙二醇二甲醚、醋酸、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水或n,n-二甲基甲酰胺。
具体实施方式
[0116]
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制着本公开的范围。
[0117]
实施例
[0118]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或/和质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6
(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker avance-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0119]
ms的测定用agilent 1200/1290dad-6110/6120quadrupole ms液质联用仪(生产商：agilent，ms型号：6110/6120quadrupole ms)。
[0120]
waters acquity uplc-qd/sqd(生产商：waters，ms型号：waters acquity qda detector/waters sq detector)thermo ultimate 3000-q exactive(生产商：thermo，ms型号：thermo q exactive)
[0121]
高效液相色谱法(hplc)分析使用agilent hplc 1200dad、agilent hplc 1200vwd和waters hplc e2695-2489液相色谱仪。
[0122]
手性hplc分析测定使用agilent 1260dad高效液相色谱仪。
[0123]
高效液相制备使用waters 2545-2767、waters 2767-sq detecor2、shimadzu lc-20ap和gilson gx-281制备型色谱仪。
[0124]
手性制备使用shimadzu lc-20ap制备型色谱仪。
[0125]
combiflash快速制备仪使用combiflash rf200(teledyne isco)。
[0126]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
[0127]
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
[0128]
激酶平均抑制率及ic
50
值的测定用novostar酶标仪(德国bmg公司)。
[0129]
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自abcr gmbh&co.kg，acros organics，aldrich chemical company，韶远化学科技(accela chembio inc)、达瑞化学品等公司。
[0130]
实施例中无特殊说明，反应均能够在氩气氛或氮气氛下进行。
[0131]
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氩气或氮气气球。
[0132]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。
[0133]
加压氢化反应使用parr 3916ekx型氢化仪和清蓝ql-500型氢气发生器或hc2-ss型氢化仪。
[0134]
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
[0135]
微波反应使用cem discover-s 908860型微波反应器。
[0136]
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
[0137]
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
[0138]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：a：石油醚/乙酸乙酯体系，b：石油醚/丙酮体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
[0139]
实施例1
[0140]
2-甲基-2-(5-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)-3-(1h-吡唑-3-基)-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)丙腈1
[0141][0142]
第一步
[0143]
4-硝基-2-(三氘代甲基)吡唑-3-甲酸甲酯1b
[0144]
将化合物4-硝基-1h-吡唑-5-甲酸甲酯1a(20g，117mmol，韶远)溶于n,n-二甲基甲酰胺(240ml)中，放入冰水中冷却，缓慢滴加三氘代碘甲烷(18g，124mmol，99+atmo％d，安耐吉)，滴完后室温搅拌18小时。减压浓缩，所得残余物中加入水(200ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(100ml*3)，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液硅胶拌样，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1b(8.2g)，产率：37.2％。
[0145]
ms m/z(esi):189.1[m+1]。
[0146]
第二步
[0147]
4-氨基-2-(三氘代甲基)吡唑-3-甲酸甲酯1c
[0148]
将化合物1b(8.2g，43.6mmol)溶于甲醇(160ml)，加入10％湿钯碳(0.82g，韶远)，氢气置换3次，常温常压搅拌17小时。反应液垫硅藻土过滤，滤液旋干。粗品用乙酸乙酯(300ml)溶解，无水硫酸镁干燥，浓缩得到粗品标题化合物1c(6.4g)，产品不经纯化直接进
行下一步反应。
[0149]
ms m/z(esi):159.1[m+1]。
[0150]
第三步
[0151]
1-(4-氨基-2-(三氘代甲基)吡唑-3-基)-3-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)丙烷-1,3-二酮1e
[0152]
将双(三甲基硅基)胺基锂的四氢呋喃溶液(1m，112ml，阿达玛斯)置于冰盐浴中降温至-10℃-0℃。将化合物(r)-1-(3-甲基吗啉)乙-1-酮1d(4.81g，33.6mmol，采用专利申请”wo2016020320a1中说明书第86页的实施例中间体-1”公开的方法制备而得)溶于四氢呋喃(30ml)，滴加到上述溶液中，滴完后0℃搅拌40分钟。滴加粗品化合物1c(5.9g，37.3mmol)溶于四氢呋喃(96ml)的溶液，用时30分钟。滴完0℃搅拌反应1小时。反应液用水(10ml)淬灭，减压浓缩，所得残余物中加入二氯甲烷(200ml)稀释，有机相用饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液硅胶拌样，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1e(3.77g)，产率：37.5％。
[0153]
ms m/z(esi):270.1[m+1]。
[0154]
第四步
[0155]
(3r)-4-(7-氯-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吗啉1f
[0156]
将化合物1e(3.27g，12.1mmol)溶于乙腈(30ml)中，加入n,n-二异丙基乙基胺(4.71g,36.4mmol)，氩气保护，冰盐浴冷却至-5℃-0℃。滴加三氯氧磷(7.45g，48.6mmol)，室温搅拌30分钟，升温至65℃搅拌3小时。反应液缓慢倾入130ml饱和碳酸钠溶液中，乙酸乙酯萃取(100ml*3)，合并有机相，饱和食盐水(50ml)反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1f(2.1g)，产率：64.1％。
[0157]
ms m/z(esi):270.1[m+1]。
[0158]
第五步
[0159]
2-甲基-2-(5-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)丙腈1h
[0160]
将化合物1f(2.1g，7.78mmol)和化合物异丁腈1g(3.23g，46.7mmol，上海毕得)溶于34ml四氢呋喃中，氩气保护，干冰丙酮浴冷却至-78℃，滴加双三甲基硅基胺基锂(46.7ml，1m四氢呋喃溶液，46.7mmol)，-60℃搅拌0.5小时，自然升至室温搅拌1小时。加水(200ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(100ml*2)，合并有机相，用饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品标题化合物1h(2.35g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。
[0161]
ms m/z(esi):303.3[m+1]。
[0162]
第六步
[0163]
2-(3-溴-5-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)-2-甲基-丙腈1i
[0164]
将粗品化合物1h(2.35g，7.77mmol)溶于47ml四氢呋喃中，室温下分批加入n-溴代丁二酰亚胺(2.42g，13.6mmol)，加完升温至60℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，倒入至100ml饱和硫代硫酸钠溶液和100ml饱和碳酸氢钠溶液的混合溶液中，室温搅拌15分钟。加入100ml乙酸乙酯室温搅拌10分钟后分液，水相用乙酸乙酯萃取(50ml*2)，合并有机相，
依次用饱和硫代硫酸钠溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1i(1.9g)，产率：64.1％。
[0165]
ms m/z(esi):381.2[m+1]。
[0166]
第七步
[0167]
2-甲基-2-(5-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)-3-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)丙腈1j
[0168]
将化合物1i(1.9g，4.98mmol)，碳酸钠(1.06g，10.0mmol)和1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-1h-吡唑(2.78g，10.0mmol，韶远)溶于40ml 1,4-二氧六环和8ml水中，氮气置换后，加入二(三苯基膦)二氯化钯(350mg，0.5mmol)，氮气置换3次，加热至85℃反应1小时。反应液冷却至室温，加入100ml水和50ml乙酸乙酯，室温搅拌15分钟。分液，水相用乙酸乙酯萃取(50ml*2)，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1j(2.26g)，产率：100％。
[0169]
ms m/z(esi):453.3[m+1]。
[0170]
第八步
[0171]
2-甲基-2-(5-((3r)-3-甲基吗啉-4-基)-3-(1h-吡唑-3-基)-1-(三氘代甲基)吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)丙腈1
[0172]
将化合物1j(2.26g，4.98mmol)分散于68ml异丙醇中，滴加17.3ml三氟乙酸，加毕，室温搅拌反应20小时。搅拌下，将反应液慢慢倒入到饱和碳酸氢钠溶液(300ml)中，放出大量气体。水层ph在7-8范围内，减压浓缩除去异丙醇。再用40ml异丙醇带两次。残余混合物用乙酸乙酯萃取(100ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(500ml)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系b纯化得到粗品(1.8g)。粗品用50ml 1n盐酸溶解，加入50ml乙酸乙酯，分液，有机相用50ml 1n盐酸萃取一次。合并水相，乙酸乙酯(50ml)反洗。水相用碳酸氢钠固体调ph至8，有黄色油状物析出。乙酸乙酯萃取(50ml*2)，合并有机相，饱和食盐水(50ml)反洗，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到标题化合物1(1.32g)，产率：72.1％，氘代率99.5％。
[0173]
ms m/z(esi):369.3[m+1]。
[0174]
1h nmr(500mhz,cd3od)δ7.69(s,1h),7.14(s,1h),6.98(s,1h),4.50(dt,1h),4.09-4.05(m,1h),4.05-3.99(m,1h),3.85(d,2h),3.69(td,1h),3.38(dd,1h),2.00(d,6h),1.30(d,3h)。
[0175]
对照例1
[0176]
(r)-2-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉基)-3-(1h-吡唑-3-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)丙-2-醇
[0177]
[0178]
参考wo2021098811a1的对照例1(实施例7)的方法制备而得。
[0179]
测试例：
[0180]
生物学评价
[0181]
测试例1、本公开化合物对atr酶的抑制效应
[0182]
以下方法用来测定本公开化合物对atr酶的抑制效应。实验方法简述如下：
[0183]
一、实验材料及仪器
[0184]
1.atr酶(eurofins pharma discovery services，14-953-m)
[0185]
2.gst标签p53蛋白(eurofins pharma discovery services，14-952-m)
[0186]
3. 384孔板(thermo scientific，267462)
[0187]
4.u型底96孔板(corning，3795)
[0188]
5.标记铕穴状化合物抗磷酸化p53蛋白抗体(cisbio，61p08kae)
[0189]
6.链接d2的抗gst抗体(cisbio，61gstdlf)
[0190]
7.atp溶液(promega，v916b)
[0191]
8.edta(thermo scientific，am9260g)
[0192]
9.hepes(gibco，15630-080)
[0193]
10.酶标仪(bmg，pherasta)
[0194]
二、实验步骤
[0195]
atr酶1nm、p53蛋白50nm、7.435μm的atp以及不同浓度(首浓度1μm，3倍梯度稀释11个浓度)的小分子化合物混合，室温孵育2小时，然后加入终止液(12.5mm hepes，250mm edta)混匀，再加入0.42ng/孔的标记铕穴状化合物抗磷酸化p53蛋白抗体和25ng/孔的链接d2的抗gst抗体。室温孵育过夜后用pherastar检测620nm和665nm荧光信号。数据使用graphpad软件处理。
[0196]
三、实验数据
[0197]
本公开化合物对atr酶的抑制活性可通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见表1。
[0198]
表1本公开化合物对atr酶抑制的ic
50
[0199]
实施例编号ic
50
/nm最大抑制率(％)10.51100对照例17397
[0200]
结论：与对照例1相比，本公开化合物具有更好的atr酶的抑制活性。
[0201]
药代动力学评价
[0202]
测试例2、本公开化合物的药代动力学测试
[0203]
1、摘要
[0204]
以大鼠为受试动物，应用lc/ms/ms法测定了大鼠灌胃给予实施例1化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本公开化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
[0205]
2、试验方案
[0206]
2.1试验药品
[0207]
实施例1化合物。
[0208]
2.2试验动物
[0209]
健康成年sd大鼠4只，雌雄各半，购自维通利华实验动物有限公司。
[0210]
2.3药物配制
[0211]
称取一定量药物，加入5％dmso、5％吐温80和90％生理盐水配置成澄明溶液。
[0212]
2.4给药
[0213]
sd大鼠禁食过夜后灌胃给药，给药剂量均为2mg/kg，给药体积均为10.0ml/kg。
[0214]
3、操作
[0215]
大鼠灌胃给药实施例1化合物，于给药前及给药后0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、11.0、24.0小时由眼眶采血0.2ml，置于edta-k2抗凝试管中，4℃、10000转/分钟离心1分钟分离血浆，于-20℃保存。
[0216]
测定不同浓度的药物灌胃给药后大鼠血浆中的待测化合物含量：取给药后各时刻的大鼠血浆25μl，加入内标溶液(喜树碱100ng/ml)50μl、乙腈200μl，涡旋混合5分钟，离心10分钟(4000转/分钟)，血浆样品取上清液0.5μl进行lc/ms/ms分析。
[0217]
4、药代动力学参数结果
[0218]
表2本公开化合物的药代动力学参数如下：
[0219][0220]
结论：本公开化合物的药代吸收良好，具有明显的药代动力学优势。
[0221]
测试例3、细胞增殖实验
[0222]
以下方法通过检测细胞内atp含量，根据ic
50
大小评价本公开化合物对lovo细胞增殖的抑制效果。实验方法简述如下：
[0223]
一、实验材料及仪器
[0224]
1.lovo，人结肠癌肿瘤细胞(南京科佰，cbp60032)
[0225]
2.胎牛血清(fbs)(gibco,10091-148)
[0226]
3.f-12k培养基(gibco，21127030)
[0227]
4.celltite-glo试剂(promega，g7573)
[0228]
5. 96孔细胞培养板(corning，3903)
[0229]
6.胰酶(invitrogen，25200-072)
[0230]
7.酶标仪(bmg，pherastar)
[0231]
8.细胞计数仪(上海睿钰生物科技有限公司，ic1000)
[0232]
二、实验步骤
[0233]
lovo细胞培养在含10％fbs的f-12k培养基中，一周传代2～3次，传代比列1:3或1:5。传代时，用胰酶消化细胞后转至离心管中，1200rpm离心3分钟，弃去上清培养基残液，加入新鲜培养基重悬细胞。在96孔细胞培养板中加入90μl的细胞悬液，密度为3.88
×
104细胞/ml，96孔板外围只加入100μl的完全培养基。将培养板在培养箱培养24小时(37℃，5％
co2)。
[0234]
将待测样品用dmso稀释成2mm，并以3倍依次稀释成10个浓度，并设置空白和对照孔。取配制成梯度浓度的待测化合物溶液5μl加入到95μl新鲜培养基中。再向培养板中加入10μl上述含药物的培养基溶液。将培养板在培养箱孵育3天(37℃，5％co2)。在96孔细胞培养板中，每孔加入50μl celltiter-glo试剂，室温避光放置5-10min，在pherastar中读取化学发光信号值，数据使用graphpad软件处理。
[0235]
三、实验数据
[0236]
本公开化合物对lovo细胞增殖的抑制活性可通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见表3。
[0237]
表3本公开化合物对lovo细胞增殖抑制的ic
50
[0238]
实施例编号ic
50
/nm最大抑制率％)122.693.6对照例131692
[0239]
结论：与对照例1相比，本公开化合物对lovo细胞增殖具有更好的抑制作用。