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NG体育生物提供质粒及细胞系构建定制服务

作者:NG体育 发布时间:2024-08-06 14:13:02 次浏览

       质粒(Plasimid),它是一种独立于宿主染色体(拟核)之外的闭合环状双链DNA分子。它具有自主复制的能力,能够在子代细胞中保持恒定的拷贝数,还能够表达它所携带的遗传信息。此外,质粒载体通常携带抗性基因或报告基因,便于筛选和示踪。这一系列特征使得质粒在基因工程中具有较高的应用价值。质粒载体在基因表达调控中的作用如携带调控元件调控基因表达;实现诱导表达;实现基因沉默等等。


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图1:(a)染色体DNA和质粒DNA示意图;(b)真核细胞表达质粒载体示例。

 

NG体育生物可提供的质粒构建服务包括:

(1)过表达质粒构建;

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图2:真核表达人源MAP3K8基因质粒图谱

(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)

(3)构建基因截短体质粒;

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图3:Stat3-full length和Stat3-delete Coiled-coiled domain截短体(红框为缺失序列)示意图

(4)亚克隆质粒构建;

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图4:将人源化FOXO1从pFlag-CMV4载体(a)中亚克隆至DOX诱导表达的PLVX-Tetone载体(b)

(5)通过慢病毒介导的基因过表达;

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图5:(a)慢病毒包装的三质粒系统; (b)Map3k8慢病毒侵染293T细胞24 h荧光图片; (c)Western blot验证蛋白表达成功。

 

(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减;

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图6:(a)DSC3-shRNA构建到pGLV3-H1/GFP shRNA慢病毒载体中;(b)DSC3-shRNA慢病毒侵染C2C12细胞24 h明场和荧光图片;(c)RT-qPCR验证mRNA水平有效敲降;(d)Western blot验证蛋白水平有效敲降。

(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除。

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图7:(a)将STAT3-sgRNA构建到lenti-CRISPR-V2慢病毒载体中;(b)Western blot验证蛋白敲除成功。

以上过表达和敲除均可提供指定稳定细胞系。


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